|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Инструкция по бактериологической диагностике туберкулезной инфекции |
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Об институте: лечебно-диагностическая работа, Новости: Наши издания: "Украинский
пульмонологический журнал" (УПЖ), Оригинальные статьи: оригинальные научные статьи, ранее нигде не публиковавшиеся Нововведения:
методические рекомендации,
информационные письма, Патенты: патенты и авторские свидетельства института Отчеты о НИР: рефераты законченных научно-исследовательских работ Подготовка кадров:
клиническая ординатура, в помощь аспиранту и соискателю Научные форумы: резолюции и обращения съездов, конференций, совещаний... Информация для специалистов: Информация для населения: полезная информация о заболеваниях легких, их профилактике и лечении Асоциация фтизиатров и пульмонологов Украины: |
3. Ідентифікація виділених культур мікобактерій
У сучасній бактеріології ідентифікація мікобактерій представляє великі труднощі. З одного боку, в результаті інтенсивної і тривалої хіміотерапії туберкульозу змінилася морфологія збудника. З іншого боку, частішими стали випадки виділення з патологічного матеріалу атипових мікобактерій. У практичних лабораторіях для диференціації M.tuberculosis від інших кислотостійких мікобактерій необхідно застосовувати найбільш прості і доступні тести, що включають бактеріологічні і біохімічні дослідження. За останнім виданням Берджі (9 видання), група 21(мікобактерії) включає 45 видів, із яких більшість являється сапрофітами, не патогенними для людини. Поряд із цим, ряд видів може викликати ураження легень, лімфатичних вузлів і інших органів. Найбільш патогенними для людини є M.tuberculosis і M.bovis. Для правильної оцінки виділених мікобактерій - ідентифікації і визначення їх ролі в захворюванні людини необхідно провести диференціацію виділених культур із використанням спеціальних методик. Комплекс цих тестів різноманітний, в залежності від кваліфікації лабораторних робітників, обсягу досліджень, що проводяться, і умов роботи лабораторії.
3.1 Бактеріологічний (культуральний) метод дослідження При культуральному методі дослідження варто враховувати ріст на яєчних, агарових і рідких живильних середовищах. Враховується також швидкість росту, температурний оптимум росту, морфологія колоній, їх колір (табл.3.1). Таблиця 3.1 - Основні диференційно-діагностичні морфологічні і ростові характеристики мікобактерій
Позначення: * Н - нефотохромогенні, С - скотохромогенні, Ф - фотохромогенні; ** - швидкість росту на щільних середовищах: повільна - протягом 4 - 6 тижнів; помірна - протягом 2-3 тижнів; швидка - протягом 2 - 7 діб.
M.tuberculosis - збудник туберкульозу у людей. Ці мікобактерії дають первинний ріст при посіві патологічного матеріалу від 3-х тижнів до 2-х місяців, рідко - до 2,5 місяців. Пасажні культури ростуть швидше. Ріст на щільному яєчному середовищі, що містить гліцерин, пишний: культури ростуть у виді шорстких r-колоній, але можуть бути гладенькими, що зливаються між собою (s-варіант), мають кремовий відтінок. На рідкому живильному середовищі мікобактерії туберкульозу утворюють плівку на поверхні, в молодих культурах - тонку, в старих - зморшкувату, грубу, а іноді навіть дають придонний крихкуватий ріст. Температурний оптимум 37-38 град. Цельсію. При 22 град. Цельсію і 45 град. Цельсію не ростуть. Морфолог(чно в мазку, забарвленому за Цілем-Нільсеном, M.tuberculosis, що виросли на яєчних середовищах, представляються вигляді поліморфних тонких спирто-, лугокислотостійких паличок, часто зігнутих, що лежать під кутом одна до одної, а іноді можна навіть бачити невеликі скупчення у вигляді так званих "кіс" (часточки від мікроколоній). М.bovis - мікобактерії, що викликають туберкульоз у великої рогатої худоби, рідко у людей, трохи коротші, з менш вираженою схильністю до розгалуження, морфологічні відмінності від М.tuberculosis не виражені. Культуральні властивості також подібні, однак на штучних середовищах ростуть повільніше і тільки при температурі 37 - 38 град. Цельсію. У первинних культурах і на середовищах, що не містять пірувату, відзначають бідний ріст; колонії дрібні, плоскі, шорсткуваті. Концентрація гліцерину в середовищі більше ніж 0,75 % впливає негативно на швидкість розмноження M.bovis. Колонії не мають пігменту, вони - білого або сірого кольору. Бактеріоскопічно відрізнити їх від M.tuberculosis не представляється можливим. Морфологічно і культурально подібні з M.africanum i BCG - "M.bovis complex" (M.bovis, BCG, M.africanum). M.africanum - основний збудник туберкульозу в Африці. Справжне поширення збудника визначити складно, тому що в багатьох лабораторіях його не ідентифікують, або плутають з M.bovis.
Атипові мікобактерії В даний час атипові мікобактерії привертають все більшу увагу бактеріологів і клініцистів. Зростаюча роль атипових мікобактерій в патології людини деякою мірою пов'язана з неправильним застосуванням антибіотиків, атипові мікобактерії характеризуються широким спектром медикаментозної стійкості і потенційною патогенністю для людини і тварин. При виділенні з патологічного матеріалу хворих атипових мікобактерій важливо встановити значення їх у патології. Особливої уваги заслуговують випадки повторного виділення з патологічного матеріалу атипових культур при відсутності в досліджуваному матеріалі M.tuberculosis. Атипові мікобактерії відрізняються від M.tuberculosis рядом ознак в залежності від їх таксономічної належності. Для систематизації атипових мікобактерій користуються угрупуванням Раньона, заснованим, головним чином, на двох ознаках - швидкості росту і пігментоутворенні. За цим угрупуванням всі атипові мікобактерії розділені на 4 групи. Представники перших 3-х груп ростуть повільно. 4-ї групи ростуть швидко. Найбільш патогенні для людини мікобактерії I і III груп. I група - фотохромогенні мікобактерії: М. kansasii, M.marinum (М.balnei), М. simiae, M.szulgai. Кислотостійкі палички; при культивуванні звичайно утворюють жовто-жовтогарячий пігмент; колонії виростають протягом 2 тижнів при температурі 37 град. Цельсію і протягом 3 тижнів - при кімнатній температурі. При культивуванні на світлі пігментоутворюючі штами дають більш інтенсивне червоно-жовтогаряче забарвлення колоній. Молоді клітини довгі і порівняно широкі, розташовуються стрічками; утворюють S- і R-колонії. Типовий вид - M.kansasii. М. kansasii. Утворюють пігмент (кристали b-каротину) тільки при рості на світлі. По ступеню шорсткості колоній штами варіюють від SR до RS, але можуть бути повністю шорсткуватими (R). Для ідентифікації кристалів каротину рекомендується вивчення колоній під малим збільшенням (30-100), їхня наявність - чітка ознака, що відокремлює М.kansasii (а також M.marinum) від інших видів. У людини викликають туберкульозоподібні ураження легень, найбільш часто спостерігають шийні лімфаденіти (скрофули) і ураження шкіри, рідше, особливо в ослаблених пацієнтів, дисеміновані ураження. M.marinum. Частіше утворюють S-колонії, відмінна риса - прискорений ріст при температурі 30-33 град. Цельсію і повна його відсутність при 37-40 град. Цельсію. Швидкість росту у різних штамів варіює від 5 до 15 діб. До 30,0 % штамів дають слабо позитивний ніациновий тест. У людини найбільш часто викликає ураження верхніх і нижніх кінцівок. I I група - скотохромогенні мікобактерії: M. scrofulaceum; M.aquae (М.gordonae) - M.aquae I типу - "водопровідні мікобактерії", M.aquae II типу - M.gordonae; M.flavescens. Варіабельні кислотостійкі палички, частіше утворюють S-колонії, плоскі чи з гострою верхівкою, у пігментоутворюючих штамів колонії забарвлені в жовто-жовтогарячі тони, незалежно від культивування на світлі чи в темряві (забарвлення на світлі більш інтенсивне). M. scrofulaceum. Умовно-патогенні мікобактеріі, що повільно ростуть, через 2 тижні утворюють жовті колонії. Мікроколонії округлі, утворені безладно розташованими паличками (як купка висипаних сірників). Викликають у дітей ураження лімфовузлів і легень. За характером росту і морфологією нагадують сапрофіти M.aquae (М.gordonae) і M.flavescens. Для їхньої диференціальної діагностики звичайно використовують тести стійкості до 5,0 % розчину NaCl, гідролізу твін-80 і відновлення нітратів, а також амідазний тест, що диференціює M.aquae I типу ("водопровідні" мікобактерії) і M.aquae II типу (M.gordonae). III група - нефотохромогенні мікобактерії: М.avium, M.intracellulare, M.xenopi, M.haemophilum. Видимий ріст культур виявляється вже через 5 - 10 діб і більше, звичайно утворюють кремові, іноді напівпрозорі, гладенькі S-колонії, що добре емульгуються у воді. При старінні культур колонії деяких штамів можуть набувати жовтогарячого забарвлення (пігментація не залежить від експозиції на світлі). Ніациновий тест негативний. М.avium. Викликає до 3,0 % захворювань на туберкульоз людини. Морфологічно і культурально аналогічна M.intracellulare і утворює з нею комплекс avium-intracellulare. Морфологічно представлені тонкими, слабо гіллястими паличками, мікроколонії зірчасті, що трансформуються в округлі утворення з безладно розташованими бактеріями. В умовах лабораторії диференціювати М.avium і М.intracellulare важко. Перша добре росте при температурі 45 град. Цельсію, а друга не дає росту протягом 3 тижнів. Від сапрофітних видів їх диференціюють по стійкості до 5,0 % розчину NaCl і нездатності гідролізувати твін-80. Лікування уражень, викликаних комплексом avium-intracellulare, представляє велику проблему, у порівнянні з іншими туберкульозоподібними ураженнями, тому що збудники виявляють множинну хіміорезистентність. M. xenopi. Молоді культури ростуть у вигляді непігментованих колоній, пізніше з'являється пігмент жовтого кольору. Морфологічно - довгі ниткоподібні палички. Ростуть при 40-45 град. Цельсію, умовно-патогенні для людини. M.haemophilum. Виявляє унікальну для мікобактерій здатність до росту на 5,0 % кров'яному агарі (також на середовищі Льовенштайна-Єнсена, доповненому 2,0 % цитратом амонійного заліза). Викликає рідкі випадки гнійних лімфаденітів у дорослих осіб з імунодефіцитами та у дітей без імунодефіциту. IV група - мікобактерії, що швидко ростуть: M.phlei, M.smegmatis, M.malmoense, M.chelonae (M.abscessus), M. fortuitum (M.minetti), M.friedmanii і ін. - сапрофітні види, клінічне значення мають лише два останніх види. Ростуть у вигляді пігментних або безпігментних колоній, частіше в R-формі. Гарний ріст дають протягом 2-5 днів при 25 град. Цельсію. Найважливіша диференціальна ознака - здатність рости при температурі 45 град. Цельсію і вище та прискорювати свій ріст при температурному оптимумі. Непігментовані колонії виростають при посіві малих кількостей матеріалу. Пігментоутворення, як відмінна ознака класифікації Раньона, у даної групи мікобактерій непридатне, тому що на утворення пігменту впливає склад середовища, вік культури, повторні пасажі, є природні пігментоутворюючі варіанти. M. fortuitum (M.minetti). Ріст у субкультурах на яєчному середовищі з'являється на 2-4 добу у вигляді "розетки". Морфологічно - короткі палички. На середовищі Льовенштайна-Єнсена можуть поглинати фарбу й забарвлюватися в зелений колір. Потенційно-патогенні для людини. |
Home •
Поиск •
Про институт • Новости •
Наши издания •
Оригинальные статтьи •
Нововведения
Патенты
• Отчеты о НДР •
Подготовка кадров • Научные
форумы
Информация для специалистов •
Информация для населения
• Медицинские услуги